M.O.S.7: Test de la streptomycino-résistance pour l'identification des souches de M. mycoides subsp. mycoides résistantes à la streptomycine

Deux souches de M. mycoides subsp. mycoides ont été utilisées pour la production de vaccins vivants atténués contre la péripneumonie contagieuse bovine en Afrique. Ce sont les souches T₁/44 et KH₃J; chacune a une variante résistante à la streptomycine, à savoir T₁-SR et KH₃J-SR respectivement. L'utilisation des souches KH₃J et KH₃J-SR a maintenant été abandonnée en raison de la faiblesse de leur pouvoir immunogène. Par conséquent, les souches de semence T₁/44 et T₁-SR sont les seules actuellement utilisées pour la fabrication des vaccins contre la péripneumonie contagieuse bovine en Afrique.

I. Matériel

- Milieu complet de numération ou milieu de Gourlay contenant de la streptomycine à une concentration finale de 1 mg/ml

- Vaccin contre la péripneumonie contagieuse bovine

- Eau distillée stérile

II. Mode opératoire

Tous les lots de vaccin contre la péripneumonie contagieuse bovine préparé à partir de la souche T₁-SR doivent faire l'objet d'un essai de résistance à la streptomycine.

1. Répartir 2.5 ml de milieu complet de numération ou de milieu de Gourlay contenant 2 mg/ml de streptomycine dans des tubes à vis de 5 ml.

2. Reconstituer le contenu d'un flacon de vaccin contre la péripneumonie contagieuse bovine à l'aide d'un volume d'eau distillée stérile froide égale au volume initial de vaccin.

3. Ensemencer respectivement deux tubes contenant le milieu d'épreuve avec 250 m l de la suspension vaccinale reconstituée, et deux autres tubes avec 250 m l du liquide de reconstitution du vaccin.

4. Incuber tous les tubes ensemencés à 37°C pendant 10 jours.

5. Observer à l'oeil nu et noter les virages des milieux incubés le troisième, le sixième, puis le dixième jour.

III. Interprétation des résultats

Le lot de vaccin passe le test de résistance à la streptomycine si le milieu que contiennent les tubes inoculés à l'aide de la suspension de vaccin vire du rosé au jaune et si le milieu inoculé avec les liquides de reconstitution reste rosé. Si le milieu inoculé à l'aide du liquide de reconstitution vire, le test n'est pas valable et doit être repris.