Las experiencias se desarrollaron entre el 7 de octubre de 1981 y el 23 de marzo de 1982.
En todos los casos, el desove se logró por medio de inducción hormonal. En base a los resultados obtenidos anteriormente, en esta segunda etapa se realizó la inducción por medio de Gonadotrofina Coriónica (GC) únicamente. El empleo de este preparado facilita mucho las operaciones, es cuantificable y no es necesario proceder a la preparación de extractos hipofisarios. En todos los casos se utilizó Gonadotrofina Coriónica liofilizada (“Gonadyl”, Institut de Serotherapie de Touluse).
Para la inducción de la ovulación se utilizaron dosis de 1000, 800 y 600 UI de GC por kilo de peso, en diferentes experiencias. Algunos ejemplares no fueron inyectados, considerándose testigos. En el caso de los machos, a todos se les suministró una dosis única de 500 UI de GC, indiferentemente del peso, con la sola finalidad de fluidificar el semen, para facilitar la inseminación artificial.
Se emplearon reproductores capturados en la Laguna del Sauce (Departamento de Maldonado) y en su afluente, el Arroyo Pan de Azúcar. Hasta su transporte a Montevideo se mantuvieron en estanques de tierra, separados por sexo, en la Estación de Piscicultura de Laguna del Sauce. Posteriormente, se transportaron al laboratorio de Biología Pesquera del INAPE en Montevideo, en tanques plásticos, en los cuales se hacía burbujear aire a presión durante todo el trayecto. Inmediatamente a su arribo al laboratorio, todos los ejemplares eran pesados, medidos e inyectados con la dosis hormonal correspondiente intraperitonealmente, y ubicados en acuarios. Como acuarios se usaron cajas plásticas de 56 × 37 cm y 30 cm de alto, con un volumen de 52 litros de agua. Según el tipo de experiencia, esto se hacía en parejas o separados por sexos. Todos los acuarios estaban conectados a un sistema de agua circulante (de la red domiciliaria) y de aire (suministrado por un compresor central) (figuras 1 y 2). Agua y aire se mantuvieron circulando constantemente durante cada experiencia. El aire se hacía burbujear por medio de piedras porosas.
La selección de los reproductores se realizó en la Estación de Laguna del Sauce. En el caso de las hembras, se utilizaron las que presentaban el abdomen distendido y blando a la palpación, indicando un desarrollo gonadal avanzado. Como reproductores machos se seleccionaron los que producían semen al presionar el abdomen.
Se emplearon dos métodos de inseminación: inseminación artificial por medio de stripping de los reproductores, y desove e inseminación natural en acuario.
a) Inseminación artificial
Varela (1982) al hacer la inseminación artificial de la especie, determinó la relación existente entre el período de inducción y la temperatura del agua. Esa relación fue utilizada para determinar el momento óptimo para realizar el stripping y proceder a la inseminación artificial. Con esto se pretendió corroborar la exactitud de esa función y mejorar la técnica con la finalidad de determinar su valor para ser utilizada a nivel comercial.
Una vez inyectados los peces, y en base a la temperatura del agua, se calculó el período de inducción de acuerdo a la función P.I. = 7638,24 × T° C- 1,92. Aproximadamente tres horas antes del momento calculado se comenzó a extraer muestras de huevos de las hembras para detectar más exactamente el momento de la ovulacuón. Cuando se consideraba que ésta había tenido lugar, se secaba cuidadosamente al ejemplar y se procedía a un masaje abdominal o stripping para recoger los óvulos en una bandeja esmaltada y seca. Inmediatamente se colectaba semen de 2 o 3 machos en un tubo de ensayo y se vertía sobre la masa de óvulos. Estos y el semen se mezclaban cuidadosamente con la mano y se agregaba agua lentamente. Luego de mezclados, se dejaban reposar por aproximadamente 5 minutos. A continuación se llenaba completamente el recipiente de agua y se dejaba reposar nuevamente. Luego, los huevos eran lavados en sucesivos baños en agua limpia. Durante todo este proceso se observaba un constante aumento con el volumen ovular debido a la hidratación. Una vez finalizada la hidratación (aprox. 30 minutos) los huevos se consideraban listos para ser incubados.
b) Inseminación natural
Con la finalidad de desarrollar un método más eficiente para la inseminación se ensayó el desove e inseminación natural en acuario. Este método también ha sido empleado en el Bagre de Canal (Bardach et al, 1972).
Los reproductores recibieron la misma inducción hormonal que en el caso de los empleados para inseminación artificial. Inmediatamente de inyectados los peces fueron colocados en parejas en los acuarios. Cada acuario fue cubierto con una tapa lo cual disminuía el stress de los peces debido a las actividades en el laboratorio. El desove y la fecundación natural se produjeron en forma espontánea.
Una vez inseminados, los huevos obtenidos fueron incubados en canastas con marco de madera y fondo de malla plástica de 1 mm de luz (figura 3) de 40 × 33 cm (1320 cm2) y una altura de 8 cm. Estas incubadoras eran suspendidas en los mismos acuarios en que se mantuvieron los reproductores, previa desinfección con un agente iodóforo. Se mantuvo el agua circulante y el aire comprimido burbujeando. Se trabajó con un máximo de ll incubadoras simultáneamente. Una vez medidos volumétricamente, los huevos se ubicaban a razón de 250 cc por incubadora, tratando de lograr una distribución homogénea en toda la superficie de la misma. Se observó que un mayor volumen de huevos por incubadora reducía sensiblemente el índice de eclosión, aunque esta observación no pudo ser cuantificada. Una vez eclosionadas, las larvas atravesaban la malla de la incubadora y pasaban al acuario. Una vez culminada la eclosión de todas las larvas se retiraban las incubadoras con los restos de huevos y detritos. De esta manera se lograba mantener una razonable calidad de agua. Las larvas se mantenían en los acuarios por un período medio de 5 días.
Figura 1 - Planta e instalaciones de laboratorio - INAPE
Figura 2a - Acuario e instalaciones para reproductures y larvas
Figura 2b - Acuario con incubadora
Figura 3 - Canasta de incubación
Durante todo el transcurso de las experiencias, se registraron las temperaturas máximas y mínimas diarias (figura 4). La máxima temperatura registrada fue de 28,5°C el día 2 de febrero de 1982 y la mínima de 13,5°C el 7 de octubre de 1981.
Figura 4 - Temperaturas máximas - mínimas del aguá
