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监视和分区–一项实用的案例研究

世界各地有很多以引起关注的特定疾病为目的的监视和监测计划。欧洲几个国家根据欧洲理事会第91/67/EEC号指令和相关的修正案以及欧洲委员会第96/240/EC号决定,对特定疾病进行监测。同样,澳大利亚在其水产规划(AquaPlan 2000)项下,针对具体可报告疾病制定了广泛的监视计划。加拿大最近被迫实施了一项监视计划,来应对首次发现的尼氏单孢子虫(Haplosporidium nelsoni),即被列入世界动物卫生组织名单中的一种软体动物髓质海绵肾病的病原体。2002年10的这次疾病的爆发正值罗马磋商会召开之际,因此负责协调应急计划工作的麦格拉德利博士只得提前离会。由于自那时起的大部分讨论都立即转向解决该疾病紧急情况,因此将以所开展(并仍在继续)的监测工作为根据的疾病爆发史和防治措施作为一项案例研究(加拿大大西洋牡蛎疾病监视)列入本报告是适宜的。

加拿大大西洋牡蛎疾病监视

历史参考数据

从传统上讲,加拿大东部沿海的土生牡蛎品种美洲巨牡蛎(Crassostrea virginica)一贯被认为不受对美国大西洋中东部沿海同类品种造成危害的那些疾病的影响。在20世纪80年代末,实施了一项贝类水生动物卫生计划,其目的是为编制一个疾病数据库,可用来对在四个大西洋省份和水文地理相关的三个水体之间移动的牡蛎进行风险评估。该数据库包含组织病理学方面信息和一组参考性幻灯片。

在1988年到2002年之间,对8000多只牡蛎进行了组织病理学方面的研究,作为下述活动的一部分,即疾病和水产养殖发展研究项目(可变抽样规模),为有授权的种群迁移(净化转运和供养殖的鱼卵/亲种)而进行的体检(抽样规模为n = 60),以及对非正常死亡、生长或产卵情况报告的审查(可变抽样规模)。在此期间,没有发现动物卫生组织名单中所列的牡蛎病原体,而且这些研究工作也为向动物卫生组织提交的年度报告提供了基础。

在1998年,利用来自一般性监视活动的数据对加拿大管辖的大西洋水域进行了分区,供政府引种和转让委员会使用以及用于教育目的。根据“同类到同类”的健康情况,圣劳伦斯湾南部的所有牡蛎被认为是同源的,而布里敦角的牡蛎则为特殊品种。这种判断是以对马尔佩克湾病的易感性实验结果为根据的。这种疾病的亚临床病状在整个圣劳伦斯湾南部和新斯科舍西南部的牡蛎中普遍存在。

发现可疑的列于动物卫生组织名单的疾病

2002年10月贝类水生动物卫生实验室在布里敦角因牡蛎大量死亡而提交的一份牡蛎样本中发现了可疑情况。组织样本被送到动物卫生组织在弗吉尼亚海洋科学研究所的软体动物疾病参考实验室。可疑病例的复制样本经过处理用于扫描和透射电子显微术,并且根据动物卫生组织出版的关于多核球X及海边生物寄生虫的初级读物,用于聚合酶链锁反应(PCR)技术。

与此同时,布里敦角的其他相关方面还单独提交了更多的样本。为便于实验室人员跟踪供提出“二次意见”而递送的样本,使用电子显微技术以及在蒙克顿和弗吉尼亚进行PCR分析(对所有样本进行PCR无偏试验)等,已着手制定旨在改善记录保存和签退的协议。

编制了包括两个步骤的应急计划:
(i) 针对重要病原体假定诊断所需采取的行动;及
(ii) 针对重要病原体确认所需采取的行动。

步骤(i)涉及就严重传染病可疑情况向地方和国家当局以及提供样本的牡蛎养殖者和省主管当局发出警报。还制定了通报计划,其中包括针对布雷顿角“某种新的”牡蛎杀手的方案以及动物卫生组织可报告病原体的首次发现。


确认在加拿大存在多核球X(MSX)疾病

2002年10月18日,动物卫生组织参考实验室确认所流行的传染病为尼氏单孢子虫病,这种寄生虫使美洲牡蛎感染MSX病。负责加拿大的首席兽医官员立即得到通知,并将信息通知了动物卫生组织总秘书处。加拿大便不再被视为无MSX病的国家。

为确诊MSX实施了应急计划,并且于2002年10月21日在布雷顿角召集受影响各方和当地食品渔业相关人士与省级主管部门和鱼类卫生兽医单位,共同开了一次会。此次会议旨在:

(a) 确立抽样的重点位置以便测定加拿大的大西洋水域中MSX 感染的范围。所选择的抽样地点包括有死亡报告的和邻近地点,过去18个月中有牡蛎从阳性区直接进入的地点,与受感染地点有水文地理方面间接联系的地点以及与受感染地点无联系的地点。

(b) 制定临时防治措施,防止在标本的采集、分析和为反馈获取结论时出现传播情况。措施包括自愿停止本地食用渔业活动,终止租约(出于保护原因停止捕渔业),并且为租赁人制定捕捞方法,帮助他们从水中打捞并销售鲜活产品,避免进行可能引起MSX蔓延的中间清洗或再次浸泡。


开展监视活动以确定大西洋加拿大牡蛎种群感染MSX的地理范围

与熟悉该地区所有牡蛎行业利益相关者的省级推广官员合作,制定了抽样办法。每天访问两个地点,并派出了两个二人小组。在访问之前和之后,对衣物及设备进行了消毒,而且生物学家还利用渔场设备和湿式渔具采集了牡蛎。所采用的操作方法是从离开已知阳性区的最远点开始向内展开。

与此同时,从邻近的两个省份收到了来自曾于夏季报告出现不正常死亡的地点的样本,当时并没有认为这种情况不正常。这些地点还与新斯科舍省的具有活储能力的牡蛎加工商有间接联系。

实验室检验

当实验室收到牡蛎之后,将它们列入一项标有编号的专门记录,用于聚合酶链锁反应和交叉检查组织解读的无偏样本。通过在牡蛎之间使用灼烧灭菌法,对所收到的所有初始样本进行处理。这样做是为了确保聚合酶链锁反应得出的任何结果可以追踪至各别具体牡蛎。

样本的规模为60只。为组织研究目的,对30只牡蛎立即进行处理,并为聚合酶链锁反应保存了组织样本。剩余的30只被固定,不立即为进行组织学研究而做进一步处理,而且将组织固定,以便在需要时进行聚合酶链锁反应检验。

解读载玻片的方法包括对明显临床感染的扫描,即注意是否有孢子发育。阳性载玻片一旦被确认,整个样本便被记录为阳性,检验工作转至下一个样本。监视活动在这个阶段更为重要的是测定存在/不存在,而不是发生率。在对整个组织部分进行扫描和高强度“搜索与营救”检验之后,阴性样本被作上标记,供处理其余30只动物之用。将任何可疑的但非结论性的组织观察样本作出标记,供进行聚合酶链锁反应检验。

30个样本中的每一个样本,其组织部分的二次抽样样本被作上标记,供第二个载玻片解读器进行分析。这包括任何可疑但非结论性的载玻片。

其他品种

出于对所提议的向本区域以外的贻贝养殖点转移的担心,还提交了来自阳性区的贻贝。将这些样本固定,供作组织学研究,但也利用MSX-PCR技术进行分析。

初步结果

尽管在确定MSX亚急性感染方面不建议划分监视期(11月至12月),但在与受感染区有着直接转移联系的布雷顿角的布拉多湖地区的牡蛎中发现了严重的疫情。布拉多湖水系以外的地点没有明显的MSX和相关病原学方面的迹象。然而,圣劳伦斯湾南部的一些牡蛎含有少量原生质,但无增殖或病原体的迹象。随后发现它们是海边生物,即过去认为加拿大牡蛎所没有的一种相关的寄生虫。海湾南部水域的盐度范围并不适合海边生物,但之后发现的小块、轻度和亚临床感染情况表明存在传播、普遍分布现象,而不是像在布拉多湖内发现的MSX点源性严重感染的情况。



为处理寄居问题进行后续抽样

与阳性地点存在直接移动上的联系这一情况提出了这样的问题,即寄生虫在布雷顿角牡蛎中已经存在了多久?以及寄生虫是否已经在周围的野生种群中寄居?在11月末至12月补充采集的样本表明,疾病已经蔓延到邻近的、不受处置或苗种移动影响的海床。

以绘图为目的的初级分区

尽管一些地点并无感染迹象,但布拉多湖作为整体被划定为MSX阳性区。原因是在布拉多湖以内地区无法将这些地点无论是从水文上或是常规性人类活动中与阳性地点隔离开来。

在布雷顿角外则沿岸设定了一个初级缓冲区,在那里检验结果表明没有MSX的迹象,尽管2002年初夏有苗种从布拉多湖的感染区移动。

虽然在冬季会继续对这些阴性样本进行分析,但其余东部海岸的牡蛎被划定处于MSX阴性区域。

为管理战略而划分区域

孢子的出现表明存在严重感染并有向水中释放MSX孢原质的可能性,它与在邻近野生牡蛎样本中发现原生质的情况说明,MSX极有可能已经在感染水域开始了传染过程。虽然观察结果建议,疾病是在最近爆发的,但是其潜伏期可能早在去年秋季就已经开始,从而导致邻近牡蛎受到感染。根据观察情况以及有关在实验室检验中MSX不可能在牡蛎之间进行直接传播的事实,涉及布拉多湖生态系统MSX传播的是某种储蓄泡而非牡蛎。


所有上述事实均说明,任何试图以消灭牡蛎的方式来从系统中根除MSX的做法都可能是无效的。因此,将工作重点放在划定区域方面,在区内能够有效地限制MSX。2003年进行的监视工作结果持续表明,MSX被限制在布拉多湖区内,而所有的转移监控活动均以这一剩余的阳性区为基础。
 


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